Aplicação de qualidade

May 03, 2023

Scientific Reports volume 13, Número do artigo: 8559 (2023) Citar este artigo

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Detalhes das métricas

Aqui, um método espectrofluorimétrico sensível e seletivo foi desenvolvido para a determinação do anestésico local ocular cloridrato de benoxinato (BEN-HCl) em colírios e humor aquoso artificial. O método proposto baseia-se na interação da fluorescamina com o grupo amino primário do BEN-HCl à temperatura ambiente. Após a excitação do produto da reação a 393 nm, a intensidade de fluorescência relativa emitida (RFI) foi medida a 483 nm. Os principais parâmetros experimentais foram cuidadosamente examinados e otimizados adotando uma abordagem analítica de qualidade por projeto. O método utilizou um planejamento fatorial completo de dois níveis (24 FFD) para obter o RFI ótimo do produto da reação. A curva de calibração foi linear na faixa de 0,10–1,0 μg/mL de BEN-HCl com sensibilidade de até 0,015 μg/mL. O método foi aplicado para analisar os colírios BEN-HCl e também pode avaliar seus níveis aumentados em humor aquoso artificial com altas % de recuperações (98,74–101,37%) e baixos valores de SD (≤ 1,11). Para investigar o perfil verde do método proposto, uma avaliação de verdura foi realizada com o auxílio do Analytical Eco-Scale Assessment (ESA) e GAPI. O método desenvolvido obteve uma pontuação de classificação ESA muito alta, além de ser sensível, acessível e ambientalmente sustentável. O método proposto foi validado de acordo com as diretrizes do ICH.

O cloridrato de benoxinato (BEN-HCl), um éster do ácido para-aminobenzóico de 2-dietilamino etil-4-amino-3-butoxi benzoato1, é usado como sal cloridrato em uma solução a 0,4% com procedimentos oftalmológicos curtos2. A pureza do BEN-HCl foi de 99,80 ± 0,6%3. As Farmacopeias dos Estados Unidos, Europa e Japonesa o listam como medicamento oficial quando administrado na conjuntiva como um agente anestésico local com menos irritação do que seu análogo, a tetracaína3,4,5. Seu perfil analítico envolveu diferentes técnicas, incluindo métodos espectrofotométricos6,7,8, eletroquímicos9 e cromatográficos (HPLC e GC)7,10,11. No entanto, devido ao alto custo do equipamento e excesso de tipo de solvente, HPLC e GC não são frequentemente utilizados em todos os laboratórios; assim, outras abordagens simples, rápidas e econômicas, como a espectroscopia, são necessárias.

No campo da ciência dos materiais, um candidato a método analítico, a espectrofluorimetria, tornou-se uma base comum para muitas determinações sensíveis12,13,14,15. Sua sensibilidade intrínseca, rapidez e ampla faixa linear de detecções tornam a utilidade da espectrofluorimetria desejável para análise e monitoramento de rotina16. Neste manuscrito, propusemos um método para a determinação de BEN-HCl baseado na interação da fluorescamina com o grupo amino primário BEN-HCl em um pH ligeiramente alcalino à temperatura ambiente, que produz um composto fortemente fluorescente. As vantagens de usar a fluorescamina como um reagente fluorogênico derivatizador de grupos amino foram a razão por trás de seu uso no método proposto. A fluorescamina tem vários benefícios em relação a outros compostos fluorogênicos, incluindo simplicidade, velocidade e ausência de requisitos de aquecimento. Embora o reagente de fluorescamina seja incrivelmente fracamente fluorescente por conta própria, ele produz um produto de reação altamente fluorescente (cátion pirrolona) quando reage com um grupo amino17. Esta reação é dependente do pH e extremamente luminosa em um meio levemente alcalino porque o cátion pirrolona é insaturado, conjugado, planar e de estrutura rígida. Em meio ácido ou fortemente alcalino, outro derivado não planar e menos conjugado é produzido.

Um dos principais objetivos dos laboratórios analíticos atualmente é avançar no desenvolvimento da química analítica verde (GAC). As doze regras básicas do GAC são os princípios dos quais todas as ferramentas de avaliação de verdura dependem18,19,20. O principal objetivo do GAC é encontrar um equilíbrio entre reduzir os riscos ambientais associados às metodologias analíticas e restabelecer a alta qualidade de sua produção. No entanto, os riscos ambientais, como produtos químicos e/ou solventes nocivos, máquinas que desperdiçam energia, a introdução de grandes quantidades de resíduos tóxicos ou riscos antecipados ao meio ambiente e à saúde humana21,22, precisam ser avaliados minuciosamente. Para esta avaliação, muitas ferramentas de avaliação de avaliação foram projetadas23. A avaliação Analytical Eco-Scale (ESA) e o Green Analytical Procedure Index (GAPI)24,25 foram utilizados para avaliar o perfil de verdura do método proposto, que se mostrou excelente verde.