Aumento da Produtividade da Reação IVT por Cromatografia HPLC

Jun 15, 2023

Isso nós bcast apresenta:Rok Sekirnik, PhD, Chefe de Desenvolvimento de Processo mRNA/pDNA, BIA Separations, agora uma empresa Sartorius.

As reações de transcrição in vitro (IVT) são normalmente realizadas como processos em lote. Considerando sua base catalítica, é possível estender os tempos de reação e os rendimentos pela adição contínua de reagentes consumidos à mistura de reação. No entanto, as estratégias de batelada alimentada relatadas até o momento conseguiram atingir apenas um aumento de 40 a 100% na produção de mRNA. Uma das principais limitações do desenvolvimento foi o baixo rendimento de análises para quantificação de precursores de mRNA e NTP; a produtividade é normalmente determinada como uma medição de ponto final da concentração de mRNA.

Neste webinar, discutiremos um método analítico baseado em HPLC usando um ligante multimodal baseado em ligante de troca aniônica/ligação de hidrogênio (PrimaS) para monitorar a reação IVT, que permite a quantificação simultânea de NTPs, reagente de capping, plasmídeo e mRNA dentro de 3,5 min.

Quando aplicado ao monitoramento da reação de IVT, uma abordagem de lote com uma produtividade média de 3-5 mg/mL pode ser convertida em lote alimentado com rendimento de 10-12 mg/mL. Duas abordagens para controlar a reação de IVT serão demonstradas, uma focando na produtividade do mRNA sem cap, outra na produtividade do mRNA com cap, exigindo assim um controle preciso da razão NPT:reagente de capping.

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